Tagi:
podłoże transportowe bakterole

Hodowla bakteryjna jest uważana za „złoty standard” w diagnostyce bakteriologicznej. Pozwala między innymi na wstępną identyfikację bakterii poprzez określenie ich
właściwości biochemicznych, określenie lekowrażliwości, a także stanowi źródło materiału do badań molekularnych. Aby hodowla spełniała swoje zadanie, podłoże powinno być dobrane zgodnie z wymaganiami patogenów obecnych w badanym materiale, zapewniając im optymalne warunki wzrostu.

 

Kontrola jakości podłoży mikrobiologicznych jest jednym z podstawowych elementów programu zapewnienia jakości w laboratorium mikrobiologicznym, ale ich przydatność polega nie tylko na właściwym przygotowaniu i przechowywaniu, ale także na doborze podłoża do rodzaju badanego materiału .


Aby zapewnić odpowiednie warunki do rozwoju bakterii , pożywki muszą spełniać szereg wymagań. Mogą one znacząco różnić się od siebie, ale wszystkie powinny zawierać odpowiednią ilość biodostępnych form pierwiastków biogennych: C, O, H, N, P, S, źródła energii, soli mineralnych, mikroelementów: Zn, Mn, Cu, Mo, Co, Ni oraz inne substancje potrzebne do wzrostu bakterii, takie jak witaminy i aminokwasy

 

Ponadto muszą one wykazywać odpowiedni potencjał oksydoredukcyjny, ciśnienie osmotyczne i pH. Większość bakterii wykazuje najobfitszy wzrost na podłożach obojętnych, ale niektóre
wymagają szczególnie niskiego lub wysokiego pH. Podłoża powinny być również jednorodne i klarowne, o ile nie zawierają nierozpuszczalnych związków, np. CaCO3  lub tłuszczów. Podłoża specjalne, przeznaczone dla wybranych grup bakterii, zawierają dodatkowo składniki selekcyjne lub różnicujące .


Hodowle obligatoryjnych bakterii wewnątrzkomórkowych, dla których tradycyjne podłoża bakteriologiczne nie są w stanie zapewnić odpowiednich warunków do wzrostu, prowadzone są w zarodkach kurzych lub hodowlach komórkowych. Do tej grupy należą między innymi Chlamydia spp., Coxiella spp., Rickettsia spp. i Mycobacterium leprae

 

Podłoża mikrobiologiczne dzielą się na dwie grupy:
- przygotowywane w laboratorium ze składników podstawowych lub dostępnych w handlu granulatów i odwodnionych proszków
- gotowe do użycia, w probówkach lub na płytkach Petriego.


Jeśli pożywki są przygotowywane w laboratorium, to laboratorium jest odpowiedzialne za jakość przygotowanych pożywek. W przypadku pożywek komercyjnych producenci są zobowiązani do kontrolowania jakości swoich produktów, co potwierdza certyfikat przedstawiający wyniki.


Certyfikaty dla podstawowych składników i sproszkowanych substratów odnoszą się wyłącznie do formy dostarczonej do laboratorium, ponieważ właściwości ostatecznej formy
pożywki zależą również od sposobu jej przygotowania. Niezależnie od tego, czy substraty pochodzą od producentów komercyjnych, czy są wytwarzane w laboratorium, musi istnieć nadzór nad wszystkimi czynnikami i etapami przygotowania, które wpływają na właściwości fizykochemiczne i użytkowe substratów.
Nadzór ten obejmuje standaryzację produkcji i przechowywania substratów oraz wdrożenie dla nich programu kontroli jakości.

 

Do najważniejszych elementów wpływających na jakość pożywek należą:
- stosowane surowce lub substraty luzem, które powinny być przechowywane w szczelnych pojemnikach w przewiewnym, chłodnym i ciemnym miejscu,
- woda, której pH powinno mieścić się w przedziale 5,5-7,5, a przewodność mierzona w temperaturze 25°C powinna wynosić nie więcej niż 25 μS/cm - przewodność jest wprost proporcjonalna do zawartości jonów soli, w tym jonów miedzi, które hamują wzrost mikroorganizmów,
- skład pożywki - odpowiednie proporcje poszczególnych składników decydują o właściwościach odżywczych i funkcjonalnych,
- sposób przygotowania pożywki zgodny z obowiązującymi procedurami i udokumentowany tak, aby
możliwe było odtworzenie przebiegu produkcji danej partii,
- przebieg procesu sterylizacji przeprowadzanego za pomocą pary wodnej pod ciśnieniem lub filtracji,
- warunki pakowania, transportu i przechowywania zapewniające stabilność właściwości pożywki:
zabezpieczające przed zanieczyszczeniem, uszkodzeniami mechanicznymi, odwodnieniem powodującym zmiany stężenia poszczególnych składników, niszczącym działaniem światła, które przy
długotrwałej ekspozycji może prowadzić do zmian składu chemicznego poprzez niepożądane reakcje pomiędzy składnikami pożywki lub ich degradację, skrajnymi temperaturami - zbyt wysoka temperatura może prowadzić do degradacji lub zmian stężenia składników, zbyt niska do wytrącanianiektórych składników, a duża temperatura do wytrącania niektórych składników, a duża temperatura do wytrącania niektórych składników.

 

Podział podłoży
Wydajne laboratorium powinno dysponować jak najmniejszą liczbą rodzajów podłoży niezbędnych do przeprowadzenia testów o określonym profilu, a kategoryzacja podłoży ułatwia ich odpowiedni dobór. W zależności od potrzeb stosuje się wiele klasyfikacji podłożyodnoszących się do ich składu, konsystencji, zawartości składników odżywczych
i zastosowania. Ze względu na praktyczne znaczenie, w serwisie najszerzej omówiono podział podłoży pod kątem ich zastosowania

 

  1. podział ze względu na skład chemiczny
  2.  podział ze względu na konsystencję
  3. .podział ze względu na zawartość składników odżywczych
  4. podział ze względu na zastosowanie



Podsumowanie
Podłoża bakteriologiczne można podzielić ze względu na skład chemiczny, konsystencję lub zawartość składników odżywczych, ale ze względów praktycznych najczęściej stosowanym podziałem podłoży w diagnostyce mikrobiologicznej jest podział ze względu na zastosowanie. Istnieje szereg podłoży bakteriologicznych dedykowanych konkretnym grupom bakterii, a także przeznaczonych do hodowli odpowiednich materiałów klinicznych. Na szczególną uwagę zasługują podłoża chromogenne, które upraszczają i przyspieszają proces identyfikacji bakterii, dzięki powstawaniu barwnych produktów hydrolizy - charakterystycznych dla konkretnych grup bakterii.
Planując badania w laboratorium, należy wziąć pod uwagę wszystkie rodzaje podłoży. Ich dobór powinien być adekwatny do zakresu badań, tak aby przy jak najmniejszej liczbie substratów
uzyskać wszystkie niezbędne informacje. Zazwyczaj jest to kwestia indywidualna, związana z charakterem działalności laboratorium, jednak w niektórych branżach, takich jak przemysł farmaceutyczny czy spożywczy, obowiązujące normy i przepisy ściśle określają wymagany zakres podłoży.